使用熒光法檢測水中葉綠素 a 時,有諸多需要注意的事項,涵蓋樣品采集與保存、儀器操作與維護、檢測環境控制以及數據處理與分析等方面,具體如下:
樣品采集與保存
采集器具清潔:使用前,采樣器具(如采水器、樣品瓶等)需用去離子水或蒸餾水徹-底清洗,確保無葉綠素 a 或其他熒光物質殘留,防止對樣品造成污染,影響檢測結果。
采樣深度與位置:根據檢測目的和水體特點,合理確定采樣深度和位置。不同深度和區域的水體,葉綠素 a 含量可能存在差異。如研究湖泊富營養化,需在不同水層和點位采樣;對于河流,要考慮不同斷面和深度的情況。
樣品保存條件:采集后的水樣若不能及時檢測,需采取適當保存措施。一般應將水樣保存在低溫、避光環境,如放入 4℃左右的冰箱,且盡量在 24 小時內完成檢測,以減少葉綠素 a 的降解和變化。
儀器操作與維護
預熱與校準:儀器使用前需按照說明書要求進行預熱,使光源和探測器等部件達到穩定工作狀態。同時,要定期用標準葉綠素 a 溶液對儀器進行校準,確保檢測結果的準確性。校準過程要嚴格按照操作步驟進行,保證標準溶液濃度準確、儀器參數設置正確。
避免光漂白:熒光法檢測中,葉綠素 a 受光激發時間過長可能發生光漂白現象,導致熒光強度降低,影響檢測結果。因此,在檢測過程中要控制好樣品的光照時間,避免長時間照射。
清潔與維護:定期清潔儀器的光學部件,防止灰塵、水汽等污染物影響光路傳輸和熒光信號的檢測。同時,要按照規定的周期對儀器進行全面維護,檢查光源、探測器等部件的性能,及時更換老化或損壞的部件。
檢測環境控制
溫度影響:溫度對熒光法檢測有顯著影響,一般來說,溫度升高會使熒光強度降低。檢測時應盡量保持環境溫度穩定,控制在儀器要求的工作溫度范圍內,必要時可使用恒溫裝置。
避免干擾物質:環境中的一些物質可能對熒光檢測產生干擾,如某些有機溶劑、重金屬離子等。檢測時要確保周圍環境無這些干擾物質,同時水樣中若存在此類物質,需進行預處理或采取相應的校正措施。
電磁干擾:強電磁場可能影響儀器的電子元件和信號傳輸,導致檢測結果不穩定或不準確。儀器應遠離大型電器設備、變壓器等可能產生電磁干擾的源頭。
數據處理與分析
多次測量取平均值:為減少測量誤差,每個樣品應進行多次測量,一般不少于 3 次,取平均值作為檢測結果。同時,要計算測量的標準偏差或相對標準偏差,評估測量結果的可靠性。
異常值處理:檢測過程中若出現異常值,要分析其產生原因,判斷是樣品本身問題、儀器故障還是操作失誤導致。若為偶然誤差引起的異常值,可按照統計學方法進行剔除;若為其他原因,需重新檢測樣品。
與其他方法比對:為確保檢測結果的準確性,可定期將熒光法檢測結果與其他經典檢測方法(如分光光度法、高效液相色譜法等)進行比對,若存在較大差異,要及時查找原因并進行校正。